在培养基初始pH值影响下，初始pH值为7.0时比较适合根瘤菌生长，过酸或过碱都会抑制根瘤菌的生长。一方面pH的改变会让有机化合物离子化，不利于有机化合物渗入细胞，继而影响微生物细胞的运输机制，促进或妨碍一些营养物质的吸收；另一方面不适合的pH值会引起微生物表面电荷的改变，不利于细胞对营养物质的吸收^[6]。在摇床转速影响下，实验发现在180r/min转速下比较适合白三叶根瘤菌生长，说明摇床转速也对根瘤菌的生长有一定的影响，摇床的快慢决定了通入培养基内的通气量，通气量过多或过少都不适合根瘤菌的生长。

在培养温度影响下，温度过高或过低也不适合微生物的生长，实验结果表明在25℃下白三叶根瘤菌更适合生长，在生长前期，根瘤菌在31℃下生长情况比较好，随着时间的增加，根瘤菌生长速度减缓。

在温度和初始pH值相互作用下，李正鹏^[7]等研究大豆根瘤菌培养条件发现温度为主要因素，而实验表明，白三叶根瘤菌在培养温度为25℃、初始pH值为7.0条件下，更适合生长；在培养基过酸或过碱情况下，不同培养温度根瘤菌生长情况都不是很理想；在不同培养温度下相同初始pH值下，根瘤菌在25℃下生长情况最好，说明在初始pH值和培养温度影响下，温度的影响要大于初始pH值的影响，与李正鹏等人研究结果相似。

在转速与初始pH值互相作用下，白三叶根瘤菌在转速160r/min、pH值为7.0时更适合生长，根瘤菌在相同转速、不同初始pH值下，结果都表明在pH为7.0时，生长情况好于其他处理下的生长情况，说明在转速和初始pH值双因素互作处理下，培养基初始pH值为主要影响因素^[11]。

在培养温度和摇床转速双因素处理下，根瘤菌在温度为25℃和28℃时，在转速为180r/min条件下生长情况较好，而随着转速的增加，根瘤菌生长速度明显降低，而在31℃下，当转速为200r/min时，根瘤菌生长情况要优于其他两种转速下的生长情况，表明在温度比较高的情况下，适当的提高摇床转速有利于根瘤菌的生长。