高血压病已经成为世界上最常见的慢性疾病，是脑血管疾病的重要病因和危险因素，是心血管疾病死亡的主要病因之一。肾性高血压是最常见的继发性高血压疾病，是由于肾实质或肾动脉病变引起的全身动脉血压升高，其中以肾血管为主，都属于难治性高血压，其药物疗效较差，心血管并发症多而严重，易发展成为恶性高血压[1]，心血管活性肽儿茶酚抑素(catestatin,CST)，通过旁分泌和自分泌功能能够有效抑制嗜铬细胞释放儿茶酚胺及促进肥大细胞释放组胺[2]，还有参与炎症反应和免疫应答等作用，已有研究发现儿茶酚抑素（CST）及其前体蛋白嗜铬蛋白A（chga）在高血压病的发生发展过程中产生了重要的作用，CST具有降血压、负性肌力作用、拮抗心肌缺氧或缺血再灌注损伤、扩张血管等多种心血管保护效应，CST在高血压早期甚至是在未出现血压升高和有遗传倾向的健康人中就低于正常水平[3] ，因此，CST可以作为诊断高血压的早期指标，有人甚至提出低血浆CST状态是介于健康和高血压的“中间型”疾病状态。但CST在肾性高血压中的作用机制，迄今仍未明了。本研究采用改进的两肾一夹法复制Goldblatt肾性高血压大鼠模型，探讨儿茶酚抑素在肾性高血压发生发展中的表达及可能作用机制。
1材料与方法
1.1两肾一夹肾性高血压大鼠模型的制备
清洁级雄性SD大鼠30只，上海斯莱克实验动物有限责任公司提供[SCXK（沪）2007-0005],体重180～220g，适应性喂养1 周后，随机均分为假手术6周组（normal，n=15），两肾一夹手术6周组(2K1C，n=15)。将2K1C组大鼠腹部手术区域备皮，5%的碘伏消毒，75%酒精脱碘，铺上无菌孔巾，沿腹正中线作手术切口打开腹腔。严格按无菌操作，找出左肾，小心、钝性分离肾蒂部筋膜，沿肾静脉下方分离出左肾动脉，穿入无菌丝线，将直径为0.30 mm的针灸针与肾动脉血管长轴紧贴平行放置，在左肾动脉自腹主动脉分叉处，用无菌3号丝线扎紧肾动脉和针灸针，然后抽出针灸针，结果造成单侧肾动脉狭窄。对侧肾脏和动脉不触及。术毕，逐层缝合腹膜和肌肉，5%的碘伏和75%酒精消毒腹部。Normal组大鼠手术操作同2K1C组，但不放置针灸针和不用丝线结扎左肾动脉。术后3天内腹腔注射青霉素钠（3×104 U/d）（山西联邦制药，国药准字H14022390）预防感染，并正常进食与喂水。
1.2动物的处理
动物饲养到规定时间后处死，取出心脏，用预冷的生理盐水清洗，剪去心房组织，沿室间隔边缘剪下右心室，用滤纸吸干，称取左心室加室间隔的重量（LV+S）。并计算（LV+S）/BW的重量比作为左心室肥大的指标。每组各取6只大鼠，每只取约100mg左心室肌、右肾组织或延髓，用于提取蛋白，待测蛋白水平；用预冷的含0.1% DEPC水的生理盐水清洗左心室、右肾组织或延髓，留取组织各约100mg，用于提取总RNA，待测mRNA水平。取大鼠动脉血1.5 ml 加入EP管中，肝素抗凝，3000 r/min 离心15 min，取上清液置-20℃冰箱待测。
1.3大鼠无创尾动脉血压的测量
分别取出各组大鼠，用大鼠固定器固定后，将大鼠置于暗盒内，露出鼠尾。用40℃的恒温水浸泡鼠尾大约30 min,待鼠尾变软，局部血管充分扩张后,将其穿过加压尾套,适度旋紧尾固定器上的固定旋钮,使大鼠尾部腹面正中与无创尾动脉血压测定分析系统的脉搏传感器紧密接触,用恒温加热毯维持温度，同时观测系统的脉搏波形,待大鼠安静、出现稳定的脉搏波后，即可开始测定血压。选择90-420 BPM（大鼠加压档），给尾套充气加压,可见脉搏波逐渐减小至消失,当压力降低等于收缩压时，开始出现脉搏波，此点血压即为鼠尾收缩压。重复测量3次,取平均值。每周1次，每次重复3次，取其均值。
1.4血浆儿茶酚胺、组胺含量测定
取血浆200 μl加入0.1mol/L 高氯酸800 μl，8000 r/min离心10 min去蛋白，取上清至EP管中8000r/min再次离心10min，采用高效液相色谱-电化学法（HPLC-ECD）测定血浆儿茶酚胺含量。使用Agilent（安捷伦）1100系列色谱仪，G1313A自动进样器，G1311A四元泵，电化学检测器（ECD）。严格按照说明书配制组胺标准品溶液、衍生剂，用0.1mol/L的高氯酸溶液将样品储备液稀释至一定浓度。在室温将样本与衍生剂按5:1的比例涡旋混合，反应1min后冰浴终止，进样体积20 μl进行衍生化反应。其中色谱柱为Agilent ZORBAX SB-Aq反相C18色谱柱（3.0×150mm，3.5μm）、缓冲盐溶液：NaH2PO4 25 mmol/L；Na2EDTA 0.5 mmol/L；辛烷磺酸钠 3 mmol/L。调节缓冲液pH至4.8，通过0.22 μm滤膜过滤、流动相比例：缓冲盐液和甲醇分别为100：14、流动相流速为0.3 ml/min；检测电位0.6 V。