姜黄素（curcumin）是从姜科植物的根茎中提取出的一种酚性色素，具有抗炎、抗肿瘤、抗HIV以及在改善神经退行性疾病的作用[1,2]。本室前期研究已证实，姜黄素灌胃具有能明显改善gp120所致学习记忆障碍大鼠的行为学作用，并可提高其学习记忆能力[3]，但姜黄素难溶于水甚至难透过血脑屏障。本研究在此基础上，基于传统开窍药冰片可增强血脑屏障通透性的特性，将冰片与现代制剂技术相结合，研制冰片-姜黄素脂质体，即一种高效低毒且易通过血脑屏障的新剂型，并对该制剂的药代动力学进行评价。

1、材料
动态光散射纳米粒径分析仪（美国Brookhaven Instruments 公司）；MiniSpin离心机（德国eppendorf公司）；旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；循环水真空泵（上海亚荣生化仪器厂）；紫外分光光度仪（日本JASCOV - 550 ）；HH- 2 数显恒温水浴锅（金坛市富华仪器有限公司）；精密电子天平（北京赛多利斯天平有限公司）；pHS- 3C pH 计（上海雷磁仪器厂 ）；AS206B 超声仪 （天津奥特赛恩斯仪器有限公司 ）；Waters 2695 型高效液相色谱仪 （美国Waters 公司）；2489 双通道可变紫外检测器（美国Waters 公司 ）；Agilent XDB C18 色谱柱 （美国Agilent 公司 ）；
卵磷脂、胆固醇、 姜黄素（分析纯）均购自国药集团化学试剂有限公司；冰片购自广州野生山草药店；维生素E 胶丸购自青岛双鲸药业有限公司 ；姜黄素对照品（中国药品生物制品检定所）；羧甲基纤维素钠（广州化学试剂厂）；甲醇为色谱纯，乙酸乙酯、无水乙醇、乙醚、氯仿、三乙胺、乙酸乙酯均为分析纯，以上试剂均由天津科密欧试剂有限公司提供。
SPF级清洁健康 Spraugue Dawley （SD）成年大鼠，共 10 只，雌雄各半，体重（200g±50）g，广东省实验动物中心提供。合格证号： SCXK （粤） 2008- 0002，粤监证字： 0082640。动物在安静、干燥、通风的环境中饲养1周后开始实验，食用普通颗粒鼠粮，自由饮用清洁用水。


2、方法
2.1冰片-姜黄素脂质体的制备
以薄膜法制备。卵磷脂和胆固醇比例 3:1，磷酸盐缓冲液离子浓度为 0.030 mol·mL-1 时，孵育温度35 ℃。
2.2 包封率的测定
精密吸取冰片-姜黄素脂质体样本溶液2 mL，10000 r·min-1离心60 min，小心取出沉淀物，溶解于5 mLPBS中，测定包含在脂质体内的药物含量A1。另精密吸取冰片-姜黄素脂质体样本溶液2 mL，PBS稀释定容至10 mL，测定溶液中全部的药物含量A2。参照2005年药典制剂通则，脂质体包封率的计算公式。具体公式如下：

2.3理化性质研究
2.3.1 粒径及粒度分布
取冰片-姜黄素脂质体溶液1 mL，双蒸水稀释10倍，倒入石英杯中，采用激光粒度散射分析仪测定粒度分布范围。
2.3.2 紫外吸收特征
按最佳工艺制备方法制备出的空白脂质体溶液和冰片-姜黄素脂质体溶液，各取适量，加入容量瓶中，甲醇定容至10 mL，摇匀。使用紫外分光光度计在190-600 nm之间进行全波长扫描，确立姜黄素的最大吸收波长。
2.4冰片-姜黄素脂质体的药代动力学研究
2.4.1姜黄素溶液的配置
精密称取姜黄素原料药样品200 mg，置于25 mL容量瓶中，加1％的羧甲基纤维素钠溶液定容至刻度，摇匀后备用。
2.4.2冰片-姜黄素脂质体溶液的配置
按上述提及最佳工艺制备方法，连续制备冰片-姜黄素脂质体，用磷酸缓冲盐溶液稀释溶解，配制成相同浓度的冰片-姜黄素脂质体口服液，超声后4 ℃保存备用。
2.4.3药代动力学实验
取大鼠9只，雌雄随机抽取，体重（200±50）g。禁食12 h后，随机分为3组，每组给药4 mL，分别口服灌胃姜黄素溶液、姜黄素脂质体、冰片-姜黄素脂质体。给药15、30、45、60、90、120、150 min后取血，冰箱冷藏保存备用。
2.4.3.1血浆样品的制备
取大鼠血浆0.2 mL，置于1.5 mL离心管，加入0.5 mL乙酸乙酯，漩涡混匀5 min后，12000 r·min-1离心5 min，上层有机相转移至另一试管，备用；离心管中继续加入0.5 mL乙酸乙酯，重复上述步骤。将两次分离的有机层合并。45 ℃真空干燥。残渣用0.2 mL甲醇溶解，0.45μm微孔滤膜过滤，备用。
2.4.3.2血浆中姜黄素分析方法的确立
2.4.3.2.1色谱条件
色谱柱为Agilent XDB-C18(250×4.6 mm, 5 μm)。流动相为甲醇：水=70:30，为防止拖尾每400 mL水加入冰乙酸1 mL。流速1.0 mL/min，波长421 nm，柱温25 ℃，进样量20μL。
2.4.3.2.2标准曲线的制备
取空白已制备好的血浆样品上清液0.4 mL，分别精密加入不同浓度的姜黄素标准品溶液，使待测物浓度为1.1、2.2、4.4、8.8、33μg·mL-1。将，用0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液，按顺序以此编号为1，2，3，4，5号。每个浓度重复进样3次，每次20μL。
3.4.3 回收率的测定
按照下表项中的比例配置供试品，在线性规定范围内，制备 3个不同浓度（8.95 μg·mL-1、9.95μg·mL-1、11μg·mL-1）的样品,在进样前均需用0.45μm微孔滤膜，取续滤液，按顺序以此编号为低浓度，中浓度，高浓度，各测定3次，即测定9次，每次20μL。本品用外标法测定。
3.4.4精密度的测定
精密度是指从均匀样品中抽取的复数个供试品进行重复分析测定时，所得到的一系列测定数据彼此之间的一致程度。所以只需取任一浓度样品，用0.45μm微孔滤膜，取续滤液，重复进样5次，每次20μL。
2.5脑组织的制备
大鼠断头处死后，迅速取出250±50 mg脑组织，放入冰中冷冻，加入0.1 mol·L-1的乙酸乙酯4 mL，冰浴下研磨成匀浆。4℃、12000 r·min-1离心20 min，收集上层有机相，下层继续用乙酸乙酯4 mL提取两次，合并三次收集的有机相层。氮气过夜吹干后，残渣用甲醇1mL溶解，3000 r·min-1离心10 min后，吸取上清液，4 ℃保存备用。进样前需经0.45μm微孔滤膜滤过。
2.5.1 脑组织中姜黄素含量测定
将上述按“脑组织的制备方法”操作的姜黄素单体组、姜黄素脂质体组以及冰片-姜黄素脂质体组大鼠脑组织，冰箱冷藏保存备用。
2.6数据分析
2.6.1利用SPSS 13.0对实验结果进行直线回归分析，显著水平P＝0.05。
2.6.2采用3P87实用药代动力学软件（中国药理学会数学专业委员会编制）进行自动拟合处理，以理论血药浓度和实验测定值相关系数作为评判标准，权重系数为1。