“劳尔”（Sedum clavatum） 是景天科景天属多肉植物，夏型种，外观小巧玲珑、植株肥厚多汁、造型特异；叶片被白粉，黄绿色，整体呈现花花状，也类似风车状，在断水的情况下会散发香味，气味恬淡清新，轻巧悠长，肥而不腻，可净化空气，这为其带来更大的市场，使其成为多肉爱好者收集栽培的热点。
目前多肉植物一般大多采用扦插、嫁接、分株等繁殖方法，但是繁殖系数都比较低、繁殖周期长，难以满足生产需要，有的连种子都不结，限制了它的推广，市场上名品价格居高不下（黄献胜和黄以琳，2001）。目前，有关多肉植物栽培、市场营销等相关的研究报道繁多（松山美纱，2012），但有关多肉植物组织培养的研究报道不多，有厦门市园林植物园对糊斑金城等多种多肉植物的种质资源组培保存和快繁技术（刘玉明和张淑娟，2012）；还有关西山寿（宋晓涛等，2007）、白银寿（张昊鹏等，2008），美吉寿（王泉等，2008），短叶巨象（黄清俊，2009）、吹雪松（黄清俊等，2003）、米邦塔仙人掌（黄清俊），褐斑伽蓝（赵娟等，2009；赵娟和王玉国，2003），克里克特寿（左志宇等，2007），水晶掌（黄清俊等，2004）等多肉植物组织培养的研究报道，尚未见到关于劳尔组培研究的报道。不同多肉植物种类和品种对培养基要求不同，本试验应用组织培养技术并结合其他多肉植物的研究结果，以“劳尔”多肉植物叶片为材料，建立“劳尔”多肉植物无菌快速繁殖体系，对其在国内推广及应用有着重要的理论和实践意义。
1 植物材料
选取多肉植物“劳尔”植株（来源于花卉市场）的叶片为外植体，将其先在自来水下冲洗5min；然后在超净工作台上，分别采用不同浓度的消毒剂组合对其进行消毒处理（表1）；最后用无菌蒸馏水冲洗35次，放置在无菌滤纸上吸干多余的水分，用于接种备用。
表1 不同消毒方案处理的组合
Table 1 Group by different disinfection solution treatment
Number
0.1%HgCl2
5 min 6 min 7 min 8 min
Alcohol（30 s） 75% X1 X2 X3 X4
95% X5 X6 X7 X8
2 培养基成分和培养条件
2.1 愈伤组织诱导
以MS为基本培养基，附加植物生长调节剂NAA、6-BA和KT，采用正交实验方法，应用正交表L16（43），对各因素进行了4水平试验筛选（见表2）。将消毒处理过的叶片接种于上述培养基中，每瓶接种3~5个叶片，设10 次重复。培养基在暗处放置5 d之后再进行接种，接种后观察其生长情况并在 60 d后统计愈伤组织的诱导率。
表2 叶片愈伤组织诱导的因素与水平
Table 2 Factors and levels for induction of leaf blade callus
Number Element
Level（mg/L）
1 2 3 4
A 6-BA 0.5 1.5 3 4.5
B NAA 0 0.1 0.2 0.3
C KT 0 0.5 1 1.5
2.2 愈伤组织块分化诱导
以3/4 MS为基本培养基，附加植物激素NAA和6-BA，进行愈伤组织块分化诱导培养（见表3）。将愈伤组织块接种至上述培养基中，每瓶接种3个外植体，设5 次重复。观察生长情况并在 45 d后统计愈伤组织块分化诱导率。
表3 不同生长调节剂配比
Table 3 The ratio of different growth regulators
Number Element Level（mg/L）
1 2 3 4 5
D 6-BA 0 1 2 3 4
E NAA 0 0.1 0.2 0.3 0.4
2.3 生根培养
将分化的新芽切下，接种至以1/2MS为基本培养基，附加不同浓度NAA的培养基中（见表4），每瓶接2个外植体，每组设3次重复。观察生长情况并在 30 d后统计生根率及生根情况。
除特殊说明外，培养基中均添加30 g/L蔗糖和9 g/L琼脂，培养基的pH值为6.2~6.4，接种后直接进行恒温光照培养，培养温度为2426℃，光照8 h/d，光照强度为l000 lx。
表4 不同NAA浓度对生根诱导的影响
Table 4 Effects of various concentration of NAA on induction of rooting
Number G1 G2 G3 G4 G5
NAA（mg/L） 0 0.01 0.02 0.03 0.04
2.4 数据统计分析
愈伤组织诱导率（%）=（形成愈伤组织的外植体数/接种的外植体总数）×100%，愈伤组织块分化率（%）=（分化的愈伤组织块数/接种的愈伤组织块总数）×100%，生根率（%）=（生根的芽数/接种的芽总数）×100%。所有数据均用DPS软件进行多重比较分析。
3 结果与讨论
3.1不同消毒方案对无菌体系建立的影响
由表5 可知，随着消毒试剂组合和处理时间不同，多肉植物外植体污染率和死亡率不同。随着升汞消毒时间的延长，乙醇组均显示污染率逐渐降低、死亡率逐渐上升的趋势；当 0.1% 升汞消毒时间相同时，75% 乙醇处理组的整体污染率高于 95% 乙醇处理组、死亡率相应的低于 95% 乙醇处理组；0.1% 升汞处理 7 min 和 8 min 的死亡率差异及其显著。综合污染率和死亡率两方面情况来看，以 X3 组，即 75% 乙醇消毒 30 s、 0.1% HgCl2 消毒 7 min 组合效果最佳，污染率和死亡率基本都可以控制在 5% 左右。
表5 不同表面消毒方法的消毒效果
Table 5 The disinfection effect of different surface disinfection method
Number X1 X2 X3 X4 X5 X6 X7 X8
Contamination （%） 7.2 5.6 4.7 3.6 6.1 5.0 4.4 3.2
Death（%） 3.7 4.8 5.1 9.7 5.3 6.7 10.5 14.8
3.2不同生长调节剂配比对劳尔叶片愈伤组织诱导的影响
由表6 可以看出，在设定的 16 种处理中，以处理 10，即 A3B2C4 诱导效果最好，平均诱导率达到 95.7%，且培养 60 d 后，叶片膨胀形成球状愈伤组织，增殖速度较快，愈伤组织呈深绿色，各因素的最优水平分别为：A3、B2、C4，即3 mg/L 6-BA、0.1 mg/L NAA、1.5 mg/L KT。但根据正交设计的特点，此处理不能作为最优配比的选择。叶片愈伤组织诱导率的直观分析结果表7 表明，极差顺序为 RA >RC >RB ，进而排出影响叶片愈伤组织诱导的因素主次顺序为：A >C >B，即 6-BA >KT >NAA，各因素的最优水平分别为：A3、B2、C3，即 3 mg/L 6-BA、0.1 mg/L NAA、1 mg/L KT。由表8 的方差分析结果的 F 值可知，A 、B 、C 3 个因素对劳尔叶片愈伤组织诱导均有显著的相关性，说明 6-BA、NAA、KT 这 3 种生长调节剂对劳尔叶片愈伤组织诱导都有明显的效果，其中以 6-BA 效果最好（F=201.38），其次为 KT（F=15.27），最小为 NAA(F=9.41)；随着 6-BA 浓度的增大，愈伤组织形成速度加快、诱导率先增大后减小，当 6-BA 浓度小于 4 mg/L 时颜色由黄色到淡绿色（图1A）、深绿色（图1B），当达到 4 mg/L 时，形成的愈伤组织呈现桃红色并深入培养基中（图1C）。各因素浓度之间的差异也有所不同，通过比较得出：3 mg/L 6-BA、0.1 mg/L NAA、1 mg/L KT 组合时的效果最好。因此，根据正交试验优先选择原则，结合诱导率的直观分析，本试验可得出三种因素的最佳配比为 A3B2C3，即 MS + 3 mg/L 6-BA + 0.1 mg/ L NAA + 1 mg/L KT。
