保健食品和中成药中含有非法添加物越来越受到人们的重视,近年关于这方面分的文献报道很多,有降压类[1],降糖类[2],壮阳类[3-4]等,但是还没有明确提出检测痛风类保健食品和中成药中非法添加物。痛风主要包括急性发作性关节炎、痛风石形成、痛风石性慢性关节炎、尿酸盐肾病和尿酸性尿路结石,重者可出现关节残疾和肾功能不全。西药治疗痛风以抗炎镇痛、控制尿酸以及激素类为主。需要长期服药,其药物不良反应大,停药后易复发。所以很多病患就希望通过中药或是保健品等,来改善体质,达到标本兼治。一些不法商家抓住病患的这种心理,在保健品和中成药中非法添加一些具有缓解痛风作用的西药,若患者在不知情的情况下长期服用,可能会引起严重后果。因此,建立一种快速、灵敏、有效、准确的抗痛风类保健品和中成药中非法添加物质检测方法十分必要。
目前,检测抗炎镇痛和激素类物质主要方法有薄层色谱法(TLC)[5-7],液相色谱法(HPLC)[8-9]、液相色谱串联质谱法[10-12] 、气相色谱质谱法[13],其中最有快速有效的方法为液相色谱串联质谱;主要检测化学物质针对抗风湿类药物侧重抗炎镇痛,而轻激素类药物,痛风类违法添加物中激素所占比例很大。与以往报道的检测抗风湿类保健品及中成药中违法添加药物的文献相比较,增加了激素类物质的种类,优化了样品的提取方法,建立了快速、灵敏、有效、准确的抗痛风类保健品和中成药中非法添加物质检测方法。
1 实验部分
1.1 仪器与试剂
超高效液相色谱-串联质谱仪(1290/Agilent 6495,美国Agilent公司),涡旋混合器,CF16RXII立式大容量髙速离心机(日本Hitachi公司),Milli-QDirecet 8 全自动超纯水机(美国Millipore公司),Eclipse Plus C18色谱柱(2.1mm×50 mm,1.8μm,美国Agilent公司)。
实验所用甲醇、乙腈、乙酸均为色谱纯。实验用水为超纯水。氢化可的松、地塞米松、曲安奈德、醋酸泼尼松龙、醋酸氢化可的松、醋酸泼尼松、醋酸地塞米松、醋酸曲安奈德、醋酸氟轻松、乙酰氨基酚、阿司匹林、安替比林、吡罗昔康、萘普生、双氯芬酸钠、吲哚美辛、布洛芬标准品(纯度均≥95%)。
1.2 标准溶液的配制
分别称取0.01g左右(精确至0.0001g)标准品于小烧杯中,用甲醇溶解并转移至100mL容量瓶中,定容至刻度,-18℃冷冻保存。准确吸取上述各标准储备液0.1mL于100mL容量瓶中,用甲醇释至刻度配制成浓度为100μg/mL的混合标准储备液,-4℃冷藏保存。用20%甲醇溶液将混合标准储备液逐级稀释至100、50、30、20、10、5.0、2.0和1.0μg/L的混合标准溶液。
1.3 样品前处理
随机取100g同一批号样品混合均匀,待测定。称取1g(精确到0.01g)混合均匀的样品,于50mL离心管中,加入25mL甲醇置于超声波中超声30min,冷却至室温后转移至50mL容量瓶中,5mL纯水多次洗涤离心管,洗液一并转移至50mL容量瓶中,纯水定容至刻度,混合均匀。离心,上清液过0.2m微孔有机滤膜,根据实际浓度适当稀释至线性范围内,待测定。