5讨论
研究了表面等离子谐振法SPR检测黄曲霉毒素B1（AFB1）的一些基础问题。SPR方法检测的基本原理可以理解为，在玻璃棱镜的表面镀了一层厚度在50nm左右的金纳米层，不同角度的入射光在纳米层发生全反射并产生表面谐振现象。金纳米层上分子的厚度直接影响到信号的强弱。
常见的SPR方法检测分子相互作用，如蛋白质之间的相互作用以及蛋白和核酸分子之间的相互作用时。通常的方法是将其中一个分子如蛋白质分子作为配基固定在SPR芯片的金纳米表面，采用直接法检测。当样本流过金纳米表面时，能够与配基结合的蛋白质或者核酸分子被保留在芯片表面，并产生一个SPR信号。而不能与配基结合在杂质分子被洗掉。SPR方法检测分子相互作用可以不用标记，直接通过分子结合就能够产生足够的SPR信号完成检测。
在真菌毒素检测中，所面临的是完全不同的情况。蛋白质分子与核酸分子都是大分子，分子量在10KD以上。与配基结合后，在SPR芯片表面能够产生足够强的信号。而真菌毒素分子是小分子，黄曲霉毒素B1的分子量为312.27。很难产生足够的SPR信号。在我们的前期研究中发现，采用将AFB1单抗固定在SPR芯片表面，用来捕获样本中AFB1的直接检测法,不能够完成AFB1的检测。
在前期研究的基础上，改进了检测方法。开发了直接竞争的SPR法用于检测样本中的AFB1。在此方法中，将AFB1-OVA合成抗原共价固定在SPR芯片表面。 而将AFB1标准品与AFB1单克隆抗体混合后，再加入到芯片中。如果混合液中不含有AFB1单抗，即AFB1单抗浓度为“0”时，AFB1单抗可以与SPR芯片上的固定抗原AFB1-OVA完全结合，产生一个SPR信号。如果混合液中含有不同浓度的AFB1，则混合液中的AFB1将会与芯片上固定的AFB1共同竞争混合液中的AFB1抗体。不同浓度的AFB1标品会对SPR信号产生不同程度的抑制。 SPR信号变化与AFB1标准品浓度呈现线性相关关系。
本研究中，采用了羧基修饰的SPR芯片。研究了不同的缓冲体系，PH值对于合成抗原在芯片表面结合的影响。根据实验结果可知，pH3.5的乙酸盐缓冲液包被效果相对最好。分析其原因，主要还是因为缓冲液酸碱度对抗原结合的影响。酸性的缓冲体系更容易将合成抗原结合在SPR芯片表面。
在此基础上，研究了SPR芯片上合成抗原AFB1-OVA的载量。主要目的是了解在一张SPR芯片的一个流池中最高能够结合多少量的合成抗原。为后期的研究打下基础。 结果显示，芯片能够结合0.2mg/ml的合成抗原。
作者：周历岚