摘要：（目的）在课题组前期研究结果的基础上，试验通过添加阴离子盐研究低饲粮阴阳离子差（DCAD, mmol/kg DM）水平，研究其对山羊瘤胃发酵参数及防治低血钙（通过检测血钙与其钙调因子水平）的影响。（方法）试验采用交叉试验设计，将6只体况一致的山羊分为2组：对照组、处理组，每组3个重复，每个重复1只羊（n=6）。两组饲粮DCAD水平分别为157和-162。对照组饲喂对照饲粮，处理组在对照组基础上添加阴离子盐（MgSO4）降低DCAD水平。（结果）结果显示：两组山羊干物质采食量差异不显著（940.8 vs. 932.3，g/d，P>0.05）。添加阴离子盐可显著降低山羊尿液pH（6.4 vs. 7.8，P<0.05）。DCAD水平对瘤胃pH、氨肽氮浓度没有产生显著影响（6.80 vs. 6.48；6.24 vs. 6.46，mg/dL；P>0.05）；2组瘤胃乙酸（11.60 vs. 15.90，mmol/L）、丙酸（2.69 vs. 3.48，mmol/L）、丁酸（2.18 vs. 2.83，mmol/L）、乙/丙（4.65:1 vs. 4.33:1）、总挥发性脂肪酸（18.11 vs. 24.38，mmol/L）差异不显著（P>0.05）。处理组血浆Ca2+（9.16 vs. 10.29，mg/dL）、VDR（49.16 vs. 57.62，ng/mL）、PTH（25.52 vs. 33.28，ng/L）与TRPV6（13.88 vs. 16.77，ng/mL）水平高于对照组，差异显著（P<0.05）；两组山羊血浆1, 25-(OH)2VD3、CT浓度差异不显著（284.94 vs. 299.94，pg/dL；124.82 vs. 114.23，ng/L；P>0.05）。（结论）由此可见，低DCAD饲粮对适口性没有影响，可降低体内酸碱平衡状态，对瘤胃发酵参数指标没有负面影响，可提高血钙及其代谢因子水平，为生产实践推广添加阴离子盐提供了有益的支撑。
低血钙作为一种营养代谢性疾病，可诱发真胃移位、胎衣不下、乳房炎等疾病，是影响生产性能的核心疾病[1-3]，是动物营养学界致力解决的重要科学课题。历经灌服水溶性钙盐、注射维生素D或其活性形式（1,25-(OH)2D3）、产前饲喂低钙日粮等处理方法后，Block[4]通过交叉试验，报道了降低日粮阴阳离子差（dietary cation-anion difference, DCAD）可增加Ca吸收，提高血Ca水平，防治低血钙，为该领域后续研究提供了基础[5-7]。
Ca的吸收包括3个步骤：首先，Ca2+经瞬时受体电位通道香草酸受体6（Transient receptor potential vanilloid receptor 6，TRPV6）介导顺浓度梯度扩散入胞；其次，入胞后Ca2+即与钙结合蛋白（Calcium binding protein D9k, CaBP-D9k）结合，并由细胞刷状缘膜顶膜转运至基底膜；最后，Ca2+在基底膜转运蛋白细胞膜钙泵（Plasma membrane Ca-ATPase 1b，PMCA1b）和钠钙交换体1（Na+/Ca2+ exchanger1，NCX1）的作用下，逆浓度梯度由基底膜跨膜出胞，进入血液[8]。上述3个步骤均受维生素D受体（VDR）的调控。
本课题组前期研究发现，Ca吸收相关蛋白表达水平的提高与增加血Ca浓度紧密相关[9-11]。血液是各种代谢物质在体内流动的场所，可反映组织蛋白表达含量。在本课题组已开展了不同DCAD水平对羊血CaBP-D9k[9]、VDR[11]含量和瘤胃体外发酵参数[12]的基础上，本试验重点研究低DCAD水平饲粮对血Ca稳恒及其调控因子水平与瘤胃内发酵参数的效应，为低DCAD防治低血钙和探讨山羊健康状况提供技术积累和基础数据。
1 材料与方法
1.1 试验设计
采用交叉试验设计，以6只体况良好、年龄（3.5±0.2 y）、体重相近（42.6±2.1 kg）的黔北麻羊为试验动物，将其分为2组：处理组和对照组，每组3个重复，每个重复1只羊（n=6）。对照组饲喂基础日粮，由精料和羊草干草构成，设计DCAD（DCAD=Na+K-Cl-S, mmol/kg DM）水平为+150。根据文献报道和课题组前期研究结果，处理组在对照组日粮基础上添加阴离子盐MgSO4·7H2O，设计DCAD水平为-150。山羊日粮精粗比为40:60，组成及营养水平见表1。经测定，设计DCAD水平和实际测量值略有差异。
1.2 饲养管理
试验共持续47 d，前10 d为调整期，主要观察山羊采食和健康状况；后30 d为试验期，分为2期，用于交叉试验，每期15 d。每个试验期前10 d为预饲期，主要观察山羊采食MgSO4·7H2O的适应性，后5 d为采样期。每个试验期结束后，持续7 d采食对照饲粮，消除处理残留效应。试验期间羊舍保持干燥，自然通风，山羊单饲于代谢笼中，留有运动空间。日饲3次，饲喂时间分别为8:00、13:00、18:00。山羊自由采食及饮水。
1.3 指标检测
1.3.1 日粮常规养分与DCAD
自预饲期开始，每天采集饲粮样品，试验结束后混匀并制成分析试样，检测常规养分水平：粗蛋白质（Crude protein, CP）、中性洗涤纤维（Neutral detergent fiber, NDF）、酸性洗涤纤维（Acid detergent fiber, ADF）、粗灰分（Ash）、粗脂肪（Ether extract, EE）、钠（Na）、钾（K）、氯（Cl）、硫（S）。CP采用凯氏定氮法，NDF、ADF采用Van Soest法，EE采用乙醚浸提法，Ash采用灼烧法，氯（Cl）采用硝酸银滴定法（GB/T6439-92）测定，硫（S）含量采用硝酸镁法（GB/T17776-1999）测定[13]，钠（Na）、钾（K）含量采用原子吸收法测定（试剂盒购自北京三雄科技公司）。DCAD计算公式：DCAD（mmol/kg）=Na(%)/0.0023 + K(%)/0.0039–Cl(%)/0.00355–S(%)/0.0016。
1.3.2 尿液pH
从每期正试期开始持续至试验结束，连续5 d，每天在采食2 h后用精密pH试纸（pH范围为5.4~7.0，6.4~8.0，上海试剂三厂）蘸取新鲜尿液与标准板比对，记录尿液pH，以此判定山羊尿液pH变化情况。
1.3.3 血液指标
晨饲前（7:00）从颈静脉采血10 mL于血液抗凝管中，3000 r/min离心15分钟，取上清血浆置于-20 ℃冰箱保存，试验结束后采用试剂盒法测定血浆Ca、甲状旁腺素（Parathyroid hormone, PTH）、降钙素（Calcitonin, CT）、1,25二羟基维生素D3（1,25-(OH)2VD3）、瞬时性受体电位通道香草酸受体亚型6（transient receptor potential vanilloid 6, TRPV6）、维生素D受体（VDR）。上述指标检测试剂盒均购自南京建成生物公司。
作者：杨春红