在世界范围内，每年有超过30%的人口患食源性疾病，造成数十亿美元的花销[1]。随着经济全球化进程的加快，食品安全问题已成为当今世界公共卫生部门研究的热点[2]。而金黄色葡萄球菌是一种常见的致病菌，据美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒仅次于大肠埃希氏菌，居第二位，占细菌性食物中毒的33 %[3]。中国每年有24万人患病，其中有1000人住院，6人死于葡萄球菌食物中毒[4]。因此，金黄色葡萄球菌检测是中国食品安全检测的常规项目之一（中国国家食品安全标准GB 4789.10-2010）。
目前对致病菌的检测中传统分离鉴定方法准确性较高，但步骤繁琐、耗时耗力[5]；免疫学检测周期短，但灵敏度较差[6，7]；PCR的方法检测时间短、灵敏性高，但需要电泳检测，增加了污染的风险[8，9]；LAMP检测方法便捷快速，但是极易产生气溶胶污染[10]。荧光定量PCR技术是最高效的种类鉴定方法之一，具有高特异性、高检测效率、低污染等优点[11]。但是由于DNA提取过程复杂，耗时长，严重阻碍了各种检测方法的发展。因此，一种简单、有效、快速、低成本的DNA提取方法将大大缩短检测的时间，并会扩大各检测方法的实际应用。已有研究报道DNA模板（在PCR或LAMP检测分析中）的成功提取应用，方法是简单地将标本煮沸[12，13]。本实验基于前人的报道，拟采用热裂解过柱法提取DNA，只需煮沸和过柱离心，不需要添加各种酶和试剂，减少了操作步骤，降低了提取成本。本研究针对金黄色葡萄球菌的nuc基因[14，15]对菌液培养物和人工污染鱼样品分别采取热裂解过柱法、试剂盒法和直接热裂法提取DNA，进行荧光定量PCR检测，确定DNA提取效果。
1.材料与方法
1.1材料
1.1.1菌株、培养基与试剂
金黄色葡萄球菌（ATCC 6538）、大肠杆菌（ATCC 25922）、沙门氏菌（ATCC 15611）、单增李斯特菌（ATCC 19112）、福氏志贺氏菌（ATCC 12022）、副溶血性弧菌（ATCC 17802）购于广东省微生物研究所和北京北纳生物公司。营养肉汤培养基 NB、平板计数培养基 PCA （青岛海博生物技术有限公司）；琼脂糖（西班牙进口分装）；ExRed核酸染色液（北京庄盟试剂公司）；DNA Marker（大连Takara生物公司）；PCR扩增试剂、基因组DNA小量提取试剂盒、SYBER Green Ex Taq（2x）(TakaRa宝成试剂有限公司）；荧光定量PCR八连管（平盖）（美国Bio-Rad公司）。
1.1.2样品
本研究中使用的鱼及样品均是从杭州教工路物美超市购买，并保持4℃运回实验室。样品：鳊鱼，鸡肉，猪肉，带鱼，榨菜，甲鱼，蛋糕，鸭蛋，鹌鹑蛋，馒头，年糕，火腿，骨肉相连，豆腐，黄金糕，生菜，莴苣，菠菜，西红柿。
1.1.3仪器与设备
荧光PCR仪、T100型PCR仪、Bio-rad 电泳仪、凝胶电泳仪均由美国Bio-Rad公司生产，BSA124S-CW电子天平（北京赛多利斯科学仪器有限公司）、RC-6 Plus高速冷冻离心机（美国Thermo公司）、Mili-O超纯水机Gradient型（美国GRANT公司）、漩涡振荡器（海门其林贝儿仪器制造有限公司）、LDZX-50KBS立式压力蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂）、Ultra-Turrax T18 basic均质机（德国IKA公司）、双层立式冰箱（海尔公司）、SW-CJ-IFD洁净工作台（上海博讯实业有限公司医疗设备厂）。
1.2方法
1.2.1 金黄色葡萄球菌的培养
将实验室保存的金黄色葡萄球菌，挑选单菌落在NB培养基上进行活化，并在PCA 培养基上涂布培养，进行平板计数。
1.2.2 样品前处理
人工污染鱼肉样品：取鳊鱼背部组织3 g，加入27 ml ddH2O，均质3 min。4℃，1000 r/min离心2分钟，吸取上清液作为检测样品。用试剂盒法提取DNA，并用qPCR进行检测。
在检测无金黄色葡萄球菌的均质液中，加入1.04×107cfu/ml的菌液，进行梯度稀释，使最终浓度范围在1.04×106~1.04 cfu/ml。然后4℃，1000 r/min离心2分钟，吸取上清液作为检测样。