枸杞(Lycium barbarum)属茄科枸杞属落叶灌木植物，适应性强。传统医学认为枸杞具有“滋肝明目，清肺补肾”之功效，现代临床医学证明枸杞具有抗氧化、抗肿瘤、延缓衰老、增强免疫能力、软化血管、降低血脂等功效，因此枸杞产品日益受到消费者的喜爱。然而，枸杞叶相对来说并未受到重视，其化学成分的研究较少。现有研究表明，枸杞叶化学成分与枸杞子类似，主要有多糖类、多酚类、甜菜碱、维生素及多种微量元素，有些含量甚至比枸杞子还要高[1]，具有很高的营养保健功效。但未能引起足够的重视，对枸杞叶相关研究报道较少。因此开展对枸杞传统非药用部位的开发利用具有重要的理论及实践意义。固态发酵技术可改变饲料原料的适口性，提高饲料原料的营养价值，能够促进营养物质的消化吸收和畜禽生长、抵御病原体侵袭、刺激机体免疫器官的成熟、调节物质代谢及降解饲料原料中可能存在的毒素等作用[2]。大量研究结果表明，植物茎叶发酵有利于植物废弃物的高效利用，减少对环境的污染，有利于开辟新的饲料资源，具有良好的经济效益和社会效益[3]。本研究以枸杞叶为原料，通过乳酸菌、枯草芽孢杆菌发酵，观察发酵底物中总黄酮、有机酸、粗蛋白、氨基酸等物质的含量变化，探讨不同菌种发酵对枸杞叶生物活性成分含量的影响，为枸杞叶在饲料中的应用提供参考数据。
1 材料
1.1 原料与试剂
枸杞叶产自宁夏，干燥粉碎，过60目筛；植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌均由本实验室培养选育；营养肉汤培养基、营养琼脂培养基、MRS肉汤培养基购买北京奥博星生物技术有限公司；芦丁对照品（纯度≧98%）购自成都曼斯特生物科技公司；没食子酸对照品（纯度≧98%） 乳酸、乙酸、丙酸对照品 购自北京德威钠生物技术有限公司；氨基酸混合标准品（2.5umol/ml） 购自美国sigma公司；其它试剂均为分析纯
1.2 仪器与设备
电子天平 梅特勒公司；高速离心机 sigma公司； GC-2010plus气相色谱仪 岛津公司；UV-160紫外可见分光光度计 莱伯特公司；
2 发酵处理方法
2.1 种子液制备
枯草芽孢杆菌：挑取少量冻存的枯草芽孢杆菌菌种划线接种到已灭菌的营养琼脂培养基上，37 ℃恒温培养24h进行菌种活化，然后将活化的菌种接种于已灭菌的营养肉汤培养基中，置于恒温摇床中，温度37 ℃，转速180 r/min，培养24 h备用。
植物乳杆菌：挑取少量冻存的植物乳杆菌菌种划线接种到已灭菌的MRS琼脂培养基上，37 ℃恒温培养24 h进行菌种活化，然后将活化的菌种接种于已灭菌的MRS肉汤培养基中，置于恒温培养箱中37 ℃培养24 h备用。
.2.2 固体发酵试验
发酵条件：一定量的枸杞叶粉，初始含水量35 %，接种量10 %。37 ℃培养120 h。
实验分为三个组，A组添加10 %植物乳杆菌，B组添加10 %枯草芽孢杆菌，C组添加5 %的植物乳杆菌和5 %的枯草芽孢杆菌。
3 含量测定
3.1 常规营养成分的测定
粗蛋白含量测定依据GB /T 6432—1994《饲料中粗蛋白测定方法》；粗纤维含量测定依据GB /T 6434—2006《饲料中粗纤维的含量测定方法》；粗灰分含量测定依据GB /T 6438—2007《饲料中粗灰分的测定》；粗多糖测定按照SN/T 4206-2015方法；水分含量测定依据GB/T 6435 - 2014《饲料中水分的测定》；氨基酸的测定依据GB /T 18246—2000《饲料中氨基酸的测定》。